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大肠菌群稀释培养过程中经过遇到的问题和解决方法

食品大肠菌群检测基础知识

  大肠菌群:是指一群能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏无芽孢杆菌 。该菌主要来源于人畜粪便,大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一。目前,食品中大肠菌群检测方法国内主要采用GB 4789.3-2016和GB/T4789.3-2003标准、进出口企业采用的ISO方法或者客户提供的检测方法等。目前国内的GB/T 4789.3-2003标准:采用三步法,即:乳糖发酵试验、分离培养和证实试验;而GB 4789.3-2016标准,采用两步法,即:发酵推测实验、证实实验。

检测该菌的方法主要有MPN法,平板计数法。MPN法中主要用到的是LST、BGLB、EC肉汤等。平板计数法主要是VRBA、去氧胆酸盐等。

在检测该菌时易出现的问题:

1、 LST、BGLB、EC等在灭菌时小倒管中气泡排不尽;

原因分析:1、在分装LST、BGLB、EC时,小倒管中有水柱;此外,高压灭菌时,需急排气,灭菌后迅速冷却。

2、灭菌后培养基颜色异常、出现沉淀;

原因分析:在制备过程中过度加热;水质不佳(GB/T 2740-2008标准中5.4.2.5中强调实验室培养基、试剂及稀释剂配制用水应经蒸馏、去离子或反渗透处理,电阻率在25℃时应≥300 000 n.cm,建议每周检测一次);或者脱水培养基质量差,煮沸过程中没有搅拌均匀培养基。

3、培养后气泡不易观察;

原因分析:在发酵试验工作中,经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡(有时比小米粒还小),有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。实验表明,大肠菌群的产气量,多者可以使发酵倒管全部充满气体,少者可以产生比小米粒还小的气泡。如果对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时,观察气泡时,可以用手轻轻打动试管,如有气泡沿管壁上浮,即应考虑可能有气体产生,然后作进一步试验。

4、VRBA、去氧胆酸盐平板上菌落特征不易辨认;

原因分析:熟悉大肠菌群在上述平板上的特征,必要可做一些阳性的对照。有些食物残渣会影响观察结果,这样需要我们在培养前仔细观察平板的状态,大的食物残渣可以做一些标记;

5、平板法培养基不凝固等。

原因分析:培养基没有经过煮沸冷却,一般是在制备过程中称量不正确、或者培养基制备后未充分混匀。

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