佛山食品检验工培训小编总结——食物及饲料中水溶性维生素K3(甲萘醌)的测定方法
1. 原理 在氨存在的条件下维生素K3(甲萘醌,VK3)与氰乙酸乙酯形成蓝色物质,在575nm下的吸光度值与维生素K3的的浓度成正比,用分光光度计测定有色物质的吸光度值,定量分析样品中维生素K3的含量。本法检出限为0.05mg。 2. 适用范围 本方法适用于强化食物及饲料中水溶性维生素K3的测定。 3. 仪器 分光光度计。 4. 试剂 本实验所用试剂均为分析级,实验用水为蒸馏水。 (1)0.1mol/L 1/2I2溶液:称取25gKI溶解于20mL水中,加入9.8g碘,混匀溶解,加水至750mL。贮存于棕色瓶中,避光保存25h。 (2)0.1mol/L Na2S2O3:将水煮沸后冷却。称取25g Na2S2O3·5H2O溶解于500mL含0.1g Na2S2O3的冷却水中,并用冷却的水稀释而1000mL。 (3)淀粉指示剂:称取2g可溶性淀粉,加于10mL水中,摇匀。然后缓慢加至200mL沸水中,煮2min。 (4)氨水+异丙醇(1+1)溶液:取异丙醇与等体积的浓氨水混合。 (5)氰乙酸乙酯(30g/L):取3g氰乙酸乙酯溶解于100mL异丙醇中。 (6)维生素K3标准溶液(0.1mg/mL):准确称取50mg维生素K3标准品,转至500mL棕色容量瓶中,用异丙醇溶解并定容至刻度。 5. 操作步骤 所有操作均需避光进行 (1)提取:准确称取约15g已混匀的样品,准确加入100mL水,搅拌10min,保证维生素K3充分溶解与混匀。过滤,如滤液浑浊,则反复过滤至澄清。 (2)氧化:吸取40mL滤液至100mL容量瓶中,加1~2滴淀粉指示剂,用0.1mol/L碘溶液滴定,至出现持续的蓝色。向溶液中滴入1滴0.1mol/L Na2S2O3消除。用水定容至刻度[注意:碘溶液的作用是作为氧化剂氧化样品中的还原性物质,多余的碘溶液可使淀粉变成蓝色,Na2S2O3则是去除多余的氧化剂,消除蓝色,以避免有色物质影响测定]。 (3)标准管和样品管的制备:分别取2套20mL比色管,分别按下表顺序加入维生素K3标准溶液、样品提取液及试剂,制备标准管和样品管。 用水定容至20mL,摇匀,放置20min。 [注:样品管和标准管中水定容的体积与显色强度、显色的稳定时间密切相关,如果定容体积过少,则色度较弱,且稳定时间短。如按本方法的操作进行,显色反应至少可以稳定2h] 标准管和样品管的制备 单位:mL
(4)比色测定:用分光光度计于575nm波长下,以标准0管作空白管,调节仪器零点,测定各管吸光度值。 式中 X——样品中维生素K3的含量,mg/100g; |