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食品中金黄色葡萄球菌的检验技术方法

食品中金黄色葡萄球菌的检验

一、实验目的要求

1、 了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。

2、 掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。

3、 掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。

4、 掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。

二、原理

葡萄球菌在自然界分布极广,空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在,大部分是不致病,也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症,还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖,产生毒素,人误食了含有毒素的食品,就会发生食物中毒,故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险,检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。

金黄色葡萄球菌能产生凝固酶,使血浆凝固,多数致病菌株能产生溶血毒素,使血琼脂平板菌落周围出现溶血环,在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。

三、试剂和仪器

(一)最先准备的器材

规格名称 数量 用途

1500ml广口瓶 1 稀释样品

2500ml三角瓶 1 制生理盐水

3250ml三角瓶 3 制培养基等

410×100mm试管 6 血浆凝固酶试验

51ml移液管 2

610ml移液管

7、直径为90 mm平皿 12 制血平板B-P平板

8250ml量筒 1

(二)应灭菌的其它器材

剪刀1 不锈钢汤匙1 称量纸适量

(三)应制备的培养基

培养基总量 所用容器

  1. 无菌水 50ml/瓶 1 250ml三角瓶(全班共用)
  2. 0.85%生理盐水 70ml/瓶 1 250ml三角瓶(全班共用)
  3. 0.85%生理盐 225ml/瓶 1 500ml三角瓶
  4. 7.5%NaCl肉汤 50ml/瓶 1 250ml三角瓶
  5. 普通营养琼脂 100ml/瓶 1 250ml三角瓶
  6. BP培养基 95ml/瓶 1 250ml三角瓶
  7. 兔血液 5ml

四、实验内容

(一)、增菌培养法

样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分离→→血浆凝固酶试验鉴别→→结果报告

第一天  样品处理和增菌培养

(一)、样品处理

固体或半固体食品:以无菌操作称取25g样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均 质杯内,于8000r/min均质12min,制成1:10样品匀液。 
液体食品::用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。

(二)、增菌培养

接种操作:吸取5mL稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中。37°C培养24小时。

培养:放于36±1℃培养24h

培养结果:在NaCl肉汤中呈混浊生长,胰蛋白胨肉汤中有时液体澄清,菌量多时呈混浊生长。

第二天  接种选择性平板进行分离培养

(一)、接种选择性平板

取增菌液1环,划线接种于血平板或BP平板。

(二)、培养

放于36±1℃培养24h

第三天  观察分离结果、镜检、做血浆凝固酶试验

(一)、观察分离结果

结果:金黄色葡萄球菌,在血平板上呈:金黄或白色菌落,大而凸起,表面光滑,周围有溶血圈;在Baird-Parker平板上:菌落为圆形,直径2-3mm,颜色灰或黑色,周围有一浑浊带,在其外层有一透明圈。

(二)、革兰氏染色、镜检

操作:革兰氏染色→镜检

结果:金黄色葡萄球菌,革兰氏阳性,显微镜下呈葡萄状排列无芽胞,直径0.5-1μm

(三)、结果报告:

综合形态特征,血平板情况以及血浆凝固酶试验结果,判别检样有否金黄色葡萄球菌作出报告。

五、思考题

1、 金黄色葡萄球菌在血平板或BP平板上的菌落特征如何?为什么?

2、 食品中能否允许有个别金黄色葡萄球菌存在?为什么?

3、 鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标是什么?

 

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