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食品中大肠菌群和检验MPN法知识点要素

         食品检验工培训课程中有一个是关于食品微生物检验,食品中大肠杆菌无处不在,如何能更好的控制和管控成为大问题,下面我们来了解一下大肠杆菌的相关知识。
1.大肠菌群的定义
•指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
•该菌群主要来源于人畜粪便, 作为粪便污染指标评价食品的卫生状况, 推断食品中肠道致病菌污染的可能。
•大肠菌群不是细菌学上分类命名,而是一组与粪便污染有关的细菌。这群细菌包括:大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌。
•生化特征及血清学反应并非完全一致。
典型大肠杆菌的IMVIC与硫化氢试验结果:++—
2.分布:
–广泛分布于自然环境。
–来源于人和温血动物的粪便。
3.卫生学意义
–大肠菌群作为粪便污染的指标菌评价样品中是否受到粪便的污染。
–大肠菌群计数的高低,直接反映了样品受粪便污染的程度。
–表示对人体健康是否具有潜在的危险性。
大肠菌群是理想的粪便污染的指标菌
–是人类和温血动物肠道菌群,在数量上占优势。
–随粪便排出体外后,在外界环境影响下,其存活时间应与肠道致病菌大致相似或稍长。
–检验方法简便,易于检出与计数。
–对消毒剂的抵抗力应不低于肠道致病菌。
4.主要修改内容
将原标准拆分为大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌计数三个独立的标准方法,标准名称变化。
大肠菌群的MPN法中乳糖胆盐等培养基改为月桂基硫酸盐胰蛋白眎(LST)肉汤为主的培养基;
增加了对样品匀液的pH范围要求;
增加了大肠菌群的平板计数法;
MPN法的结果报告由原每100g(mL)大肠菌群的MPN值,修改为每1 g(mL)大肠菌群的MPN值

  大肠菌群检验MPN法

1.MPN法注意事项:
全过程不得超过15min
样品匀液的pH值应在6.5~7.5之间,
(如接种量需要超过1mL,则用双料LST肉汤)
48h±2h为最终观察结果时限。结果也以此时为最终结果
2.MPN法培养基:LST、BGLB
(1)月桂基磺酸盐胰蛋白胨(LST)
月桂基磺酸钠能抑制革兰氏阳性菌的生长,同时比胆盐的选择性和稳定性好。由于胆盐与酸产生沉淀,沉淀有时候会使对产气情况的观察变得有些困难;
乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌;
胰蛋白胨提供基本的营养成分;
LST肉汤是国际上通用的培养基,与乳糖胆盐肉汤的作用和意义相同,但具有更多的优越性
发酵试验判定原则:产气为阳性
检测步骤减少(不必分离培养),检测时间缩短24h
注:如接种量超过1mL,则应用双料LST肉汤
(2)煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)
胆盐可抑制革兰氏阳性菌
煌绿是抑菌抗腐剂,可增强对革兰氏阳性菌的抑制作用。
乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌。
发酵试验判定原则:产气为阳性。由于配方里有胆盐,胆盐遇到大肠菌群分解
乳糖所产生的酸形成胆酸沉淀,培养基可由原来的绿色变为黄色,同时可看到管底通常有沉淀
3.MPN检索表的应用
MPN(最可能数most probable number)是表示样品中活菌密度的估测。因此MPN值只是活菌密度的估算值,并不是样品中活菌数的真值。
4.使用MPN检索表的注意点
这个MPN检索表是ISO、FDA、AOAC、USDA/FSIS、北欧等标准通用的。
表里的数字是有小数点的。
报告单位不同。现报告单位为g/ml,而原报告单位是100g/ml。
原标准MPN表有64个组合,而现标准MPN表只有40个组合
当实验结果在MPN表中无法查找到MPN值时,如:阳性管数为122123232233等时,建议增加稀释度(可做4~5个稀释度),使样品的最高稀释度能达到获得阴性终点(如果污染程度不能判定,则多加一稀释度),然后再遵循相关的规则进行查找,最终确定MPN值。

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