生活饮用水氨氮的测定纳氏试剂分光光度法验证报告
检验依据:GB/T 5750.5-2006.9.1
1.仪器参数:
仪器:UV-1800紫外分光光度计
仪器条件:波长:420nm(玻璃比色皿10mm)
2.操作过程:试样按GB/T 5750.5-2006.9.1标准步骤进行处理。
3.试剂配制:依据GB/T 5750.5-2006.9.1 试剂要求的方法配制。
4.校准曲线:
标准溶液配制:取5.00ml氨氮标准储备液(ρN=1000μg/mL),稀释成10μg/mL的氨氮标准工作液。
取50ml比色管8支,分别加入氨氮标准工作液0mL、0.10mL、0.20mL、0.30 mL、0.50 mL、0.70 mL、0.90 mL及1.20 mL,对高浓度氨氮的标准系列,另取8个50 mL比色管,分别加入0 mL、0.50mL,1.00mL,2.00mL,4.00mL,6.00mL,8.00mL,10.00mL氨氮标准工作液,加无氨水至刻度。加入1.0ml酒石酸钾钠溶液(4.5),和1.0 mL纳氏试剂(4.4.2),摇匀,放置10min后,以水作参比,测量吸光度。
以空白校正后的吸光度为纵坐标,以其对应的氨氮含量(μg)为横坐标,绘制标准曲线。
标准溶液系列及标准曲线见表1和图1。
表1(1) 低浓度氨氮标准系列
编号 |
氨氮含量 µg |
吸管值A |
|||
1 |
2 |
3 |
平均值 |
||
1# |
0 |
0.000 |
0.000 |
0.000 |
0.000 |
2# |
1 |
0.004 |
0.004 |
0.004 |
0.004 |
3# |
2 |
0.008 |
0.008 |
0.008 |
0.008 |
4# |
3 |
0.011 |
0.012 |
0.013 |
0.012 |
5# |
5 |
0.021 |
0.020 |
0.021 |
0.021 |
6# |
7 |
0.028 |
0.029 |
0.028 |
0.028 |
7# |
9 |
0.036 |
0.035 |
0.037 |
0.036 |
8# |
12 |
0.048 |
0.049 |
0.048 |
0.048 |
图1(1)标准曲线
表1(2) 高浓度氨氮标准系列
编号 |
氨氮含量 µg |
吸管值A |
|||
1 |
2 |
3 |
平均值 |
||
1# |
0 |
0.000 |
0.000 |
0.000 |
0.000 |
2# |
5 |
0.0022 |
0.0021 |
0.0021 |
0.021 |
3# |
10 |
0.0040 |
0.0039 |
0.0040 |
0.040 |
4# |
20 |
0.077 |
0.077 |
0.077 |
0.077 |
5# |
40 |
0.155 |
0.156 |
0.156 |
0.155 |
6# |
60 |
0.228 |
0.229 |
0.228 |
0.228 |
7# |
80 |
0.301 |
0.302 |
0.301 |
0.301 |
8# |
100 |
0.381 |
0.381 |
0.381 |
0.381 |
图1(2)标准曲线
5.方法检出限
在50ml比色管中,加无氨水至标线,按实验步骤制备试剂空白,测定20次试剂空白的吸光度,计算出20次试剂空白吸光度的标准偏差,按IUPAC规定DL=KS/b求出方法检出限,其中b为标准曲线的斜率,K=3。计算结果如表2所示。
表2 方法检出限
顺序号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
吸光度 |
0.0021 |
0.0023 |
0.0021 |
0.002 |
0.0022 |
0.0021 |
0.0023 |
0.0022 |
0.002 |
0.0021 |
顺序号 |
11 |
12 |
13 |
14 |
15 |
16 |
17 |
18 |
19 |
20 |
吸光度 |
0.0023 |
0.0022 |
0.002 |
0.0019 |
0.0021 |
0.002 |
0.0022 |
0.0021 |
0.0023 |
0.002 |
标准偏差S |
0.000121 |
|||||||||
检出限 (mg /L) |
0.02 |
|||||||||
公式 |
DL=KS/b( K=3, S:空白的标准偏差,b:曲线斜率。) | |||||||||
备注 |
———— |
6.精密度
方法验证中,对高、中、低3个浓度样品分别做6次平行实验,分别计算出RSD值,结果见表3所示。
表3 方法精密度
顺序号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
检测平均值(mg/L) |
相对标准偏差RSD(℅) |
|
1# |
含量 (mg /L) |
0.512 |
0.505 |
0.526 |
0.532 |
0.489 |
0.497 |
0.510 |
3.25 |
2# |
0.321 |
0.323 |
0.298 |
0.315 |
0.312 |
0.32 |
0.315 |
2.92 |
|
3# |
0.096 |
0.108 |
0.102 |
0.106 |
0.099 |
0.101 |
0.102 |
4.41 |
由实验数据表明,本方法测定的RSD均小于5%,符合精密度测试要求。
7.空白及样品测定:依据GB/T 5750.5-2006.9.1测定空白及样品中氨氮的含量,结果见表4。
表4 空白及样品的测定值
样品 |
取样量(mL) |
定容体积 (mL) |
测定值 (ug) |
含量 (mg/L) |
AVE (mg/L) |
Blank—1 |
50.00 |
50.00 |
—- |
—- |
—- |
Blank—2 |
50.00 |
50.00 |
—- | —- | |
Sample—1 |
50.00 |
50.00 |
14.8 |
0.30 |
0.30 |
Sample—2 |
50.00 |
50.00 |
15.5 |
0.31 |
8. 准确度(加标回收)
分别向25.00mL试样中加入氨氮标准工作液(ρ=10ug/mL )1.00mL,4.00mL,7.00mL,使其加标量为10.0µg,40.0µg,70.0µg,每个加标量分别制备6份样品,按照实验步骤进行处理,分别计算回收率,结果见下表所示。
表5 回收率
样品中氨氮的含量(mg/L) | 取样量(ml) | 试样中氨氮的含量B(ug) | 添加量A(ug) | 测定值C(ug) | 回收率(%) | 平均回收率(%) |
0.30 |
25.00 |
7.50 |
10.0 |
16.5 |
90 |
98.7 |
25.00 |
7.50 |
17.2 |
97 |
|||
25.00 |
7.50 |
18.3 |
108 |
|||
25.00 |
7.50 |
17.6 |
101 |
|||
25.00 |
7.50 |
16.9 |
94 |
|||
25.00 |
7.50 |
17.7 |
102 |
|||
25.00 |
7.50 |
40.0 |
46.9 |
98.5 |
98.1 |
|
25.00 |
7.50 |
45.6 |
95.3 |
|||
25.00 |
7.50 |
45.2 |
94.3 |
|||
25.00 |
7.50 |
47.8 |
100.8 |
|||
25.00 |
7.50 |
48.1 |
101.5 |
|||
25.00 |
7.50 |
46.8 |
98.3 |
|||
25.00 |
7.50 |
70.0 |
75.6 |
97.3 |
98.0 |
|
25.00 |
7.50 |
74.1 |
95.1 |
|||
25.00 |
7.50 |
75 |
96.4 |
|||
25.00 |
7.50 |
78.9 |
102.0 |
|||
25.00 |
7.50 |
77.8 |
100.4 |
|||
25.00 |
7.50 |
75.3 |
96.9 |
由实验数据表明,本方法测定的回收率在98.0%~98.7%之间,说明本实验准确度良好。
9.是否对方法偏离?
否。
10.结论:
对生活饮用水氨氮的测定符合GB/T 5750.5-2006.9.1的要求。
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