微生物培养基的配制和灭菌

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一、原理

培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。一般来说，培养基包括有水份、碳源、氮源、无机盐类以及生长因素等五大类营养成份。此外还得有适宜的PH值，一定的渗透压(即浓度)以及氧化还原电位等。

　1、培养基的分类

据组成成分可分为:

1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。

2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。

3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。

　按用途可分为

1.基础培养基：能满足各种微生物的营养需求

加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，使其快速生长，便于分离

3.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目标微生物得到富集，便于分离

4.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。

　2、培养基的配制

(1)称量

按培养基的配方准确称取各成分，其中牛肉膏放在小烧杯里称量，其他成分放在称量纸上称量。

(2)溶化

用烧杯先装少许水,依次将药品倒入铝锅中，加足水，然后在电炉上加热溶化。

(3)PH值

用精密的PH试纸测定，并用1%氧化钠或5%盐酸调节到所需的PH值。

(4)过滤

趁热用纱布将培养基进行过滤。

(5)分装

过滤后根据不同需要，立即趁热装入试管或三角瓶等容器中。

注意事项

(1)不要使培养基沾在管口，如沾上，需用干净的纱布擦干净。

(2)液体培养基：分装高度以试管的1/4左右为宜。

(3)固体培养基：分装试管，其装量为管高的1/6~1/5灭菌后制成斜面。分装三角瓶容量之一半为宜。

(4)半固体培养基：分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后，垂直待凝成半固体深层琼脂。

6)做棉塞

装好培养基的试管都要加上棉塞，这样既可过滤空气，避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发，制棉塞的方法多种，形状各异，总原则如下：

(1)用脱脂棉制作(脱脂棉花易吸水)

(2)松紧适合

(3)塞头不要太大，一般为球状。

(7)包装

试管口或三角瓶口棉塞部分，用牛皮纸扎，以防灭菌时水蒸气打湿棉塞。

(8)灭菌

灭菌是指杀死物品上或环境中的所有微生物。

灭菌方法可分为四种：物理灭菌、机械灭菌、化学灭菌和生物灭菌。

物理灭菌：1、热力灭菌：

2、紫外光灭菌：一般应用于无菌室和接种箱的灭菌。

•干热灭菌：适用于玻璃仪器，将物品放入烘箱，160~170oC，1~2小时。

•火焰灭菌：适用于常用用具，如接种环、镊子等。灭菌方法是放在火焰上直接灼烧。

•湿热灭菌：

•(1)高压蒸汽灭菌：适用于培养基、衣物等的灭菌。

•(2)间歇蒸汽灭菌：适用于不耐高温的培养基或无高压蒸汽灭菌锅时。

•(3)巴斯德灭菌：适用于牛乳类等不耐高温的物体。

紫外光灭菌：一般应用于无菌室和接种箱的灭菌

高压蒸汽灭菌

•高压蒸汽灭菌锅是一个耐高压又密闭的金属锅。它是利用在密闭条件下产生高压蒸汽来达到灭菌的效果。其温度在100oC以上，有强大的杀菌能力。因此它是一种用途广泛，效率高的灭菌工具。

•分类：1、卧式 2、立式

•具体操作步骤：

•(1)加入适量自来水于灭菌锅中(至水位线)

•(2)摆入上述包装好的待灭菌的培养基，注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。

•(3)加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气(对角线均匀拧旋)

•(4)打开放气阀，打开电源，自开始产生蒸汽后10分钟(此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽)关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时(15磅/时2)控制热源维持所需时间(30分钟)然后停止加热，让其自然冷却。

•(5)待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。

•注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。

•(6)自锅中取出灭菌好的培养基，放置稍冷却后摆成斜面，而后至37oC恒温箱培养24小时，无菌生长，方可保存备用。

• 应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽，否则虽然压力表已指15磅/时，但锅内的温度还只有100oC，结果往往造成灭菌不彻底。

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