食品检验工培训

食品中沙门氏菌检测方法和步骤

  二、食品微生物检验技术

1.菌落总数

2.大肠菌群

3.霉菌和酵母菌

4.金黄色葡萄球菌

5.沙门氏菌

5.沙门氏菌

5.1检验程序

5.2 操作步骤

5.2.1 前增菌

称取25g(mL)样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中,以8000 r/min~10000 r/min均质1min~2min,或置于盛有 225 mLBPW的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2 min。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀。 如需测定pH值,用1mol/mL无菌NaOH或 HCl调pH6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中,如使用均质袋,可直接进行培养,于36℃±1℃培养8h~18h。如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min,或2℃~5℃不超过18h解冻。

5.2.2 增菌

轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1 mL,转种于10 mL TTB 内,于42℃±1℃培养18h~24h。同时,另取1mL,转种于10mL SC内,于36℃±1℃培养18h~24h。

5.2.3 分离

分别用接种环取增菌液 1 环,划线接种于一个 BS 琼脂平板和一个 XLD 琼脂平板(或 HE 琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板)。于36℃±1 ℃分别培养 18 h~24 h(XLD 琼脂平板、HE 琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板)或40h~48h(BS 琼脂平板),观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。

沙门氏菌在不同培养基上菌落特征

 

5.2.4 生化试验(初鉴别)

5.2.4.1 自选择性琼脂平板上分别挑取 2 个以上典型或可疑菌落,接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再于底层穿刺;接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板,于 36 ℃±1 ℃培养 18 h~24 h,必要时可延长至 48 h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内,沙门氏菌属的反应结果见表 2。

TSI试验和赖氨酸脱羧酶试验

5.2.4.2 接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水(供做靛基质试验) 、尿素琼脂 (pH7.2) 、氰化钾(KCN) 培养基,也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于 36 ℃±1 ℃培养 18 h~24 h,必要时可延长至 48 h,按表 3 判定结果。将已挑菌落的平板储存于 2 ℃~5 ℃或室温至少保留 24 h,以备必要时复查。

5.2.4.3

反应序号 A1:典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN 和赖氨酸脱羧酶 3 项中有 1项异常,按表 4 可判定为沙门氏菌。 如有 2 项异常为非沙门氏菌。

5.2.4.4

反应序号 A2:补做甘露醇和山梨醇试验,沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性,但需要结合血清学鉴定结果进行判定。

5.2.4.5

反应序号 A3:补做 ONPG。ONPG 阴性为沙门氏菌,同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。

5.2.4.6 生化鉴定 生化鉴定试剂盒或微生物生化鉴定系统鉴定

5.3结果判定

综合以上生化试验和血清学鉴定的结果,报告25 g(mL)样品中检出或未检出沙门氏菌。

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