1.菌落总数
2.大肠菌群
3.霉菌和酵母菌
4.金黄色葡萄球菌
5.沙门氏菌
4.金黄色葡萄球菌
GB4789.10-2010 第一法 金黄色葡萄球菌定性检验
4.1定义
金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus ) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属(Staphylococcus)，有“嗜肉菌”的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。
4.2危害
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
4.3 检验程序
4.4 操作步骤
4.4.1 样品处理
称取 25 g 样品至盛有 225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min， 或放入盛有 225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。若样品为液态，吸取 25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或 10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。
4.4.2 增菌和分离培养
4.4.2.1 将上述样品匀液于 36℃±1℃培养 18 h～24 h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。(增菌)
4.4.2.2将上述培养物，分别划线接种到 Baird-Parker 平板和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培养18h～24h或45h～48h。
4.4.2.3 金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker 平板上，菌落直径为 2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落; 但无混浊带及透明圈。 长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色(有时为白色)，菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。
在BP平板上菌落特征
在血平板上菌落特征
4.4.3 鉴定
4.4.3.1 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5μm～1μm。
4.4.3.2 血浆凝固酶试验：挑取Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ±1℃培养18h～24h。
取新鲜配置兔血浆 0.5 mL，放入小试管中，再加入 BHI 培养物 0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，置 36±1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固(即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块)或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36±1℃培养18 h～48 h，重复试验。
4.5 结果与报告
4.5.1 结果判定
符合4.4.2.3 、4.4.3，可判定为金黄色葡萄球菌。
4.5.2 结果报告
在 25 g(mL)样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。
附革兰氏染色法
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
1)涂片固定。
2)草酸铵结晶紫染1分钟。
3)水洗。
4)加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5)水洗，用吸水纸吸去水分。
6)加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，约30秒后水洗，吸去水分。
7)蕃红染色液染1分钟后，水洗。干燥，镜检。
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