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沙门氏菌、霉菌和酵母的检测方法

          食品中的霉菌是比较难检验的,我们的食品检验员通常会因为疏忽或者防范方法不对,导致霉菌滋生。由于霉菌常以孢子的形式于空气中到处传播,而多种样品是要求霉菌酵母菌不得捡出,因此检测霉菌时需特别小心操作,取样用品、稀释用水和吸管吸头等都需仔细消毒,接种时尽量避免空气流动,动作要干净利落,每次最好用灭菌生理盐水接一片空白对照,以免出现假阳性结果。在我们日常的食品检验工培训中也会指导学员如何避免检验过程中的疏忽和检验的操作失误。

一、霉菌和酵母的检测方法

 一、霉菌和酵母的检验适用范围:本品可用于各类食品及饮用水中霉菌和酵母菌的计数。

 二、快速检验的方法原理:将霉菌营养培养基、吸水凝胶和酶显色剂加载在纸片上,通过培养,在酶显色剂的放大作用下,使霉菌和酵母菌在纸片上显现出出来,通过计数报告结果。与传统方法相比,省去了配制培养基、消毒和培养器皿的清洗处理等大量辅助性工作,即开即用,操作简便。培养时间由一周缩短为48h~72h。

三、快速检验的操作方法:1样品处理:无菌称取样品25g(或25mL)放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内,经充分振摇做成1:10的稀释液,用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌水的试管内,用1mL灭菌吸管反复吸吹50次做成1:100的稀释液,以此类推,每个稀释度更换一支灭菌吸管。2接种:1)一般食品选2~3个稀释度进行检测,含菌量少的液体样品(如食用纯水和矿泉水等)可直接用原液检测。将检验纸片水平放台面上,揭开上面的透明薄膜,用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL,均匀加到中央的滤纸片上,然后轻轻将上盖膜放下,静置5min,每个稀释度接种两片。2)用手指先沿方格区边缘刮一下,防止水外流,然后再在中间轻轻推刮,使水分在纸片方格区内均匀分布,并将气泡赶走。3培养:将加了样的检验纸片每12片叠放在一起,放入自封袋中,平放在28℃培养箱内培养48h开始观察计数。4结果判断与计数:霉菌和酵母菌在纸片上生长后会显示蓝色斑点,霉菌菌落显示的斑点略大或有点扩散,酵母菌落则较小而圆滑,许多霉菌在培养后期全呈现其本身特有的颜色。选择菌落数适中(10~50个)的纸片进行计数,乘以稀释倍数后即为每克(或毫升)样品中霉菌和酵母菌的数目。

  二、沙门氏菌的检测方法

一、沙门氏菌快速检验适用范围:可用于各类食品和原料中沙门氏菌的定性和初筛检测。以及突发事件应急检测需要。

二、沙门氏菌快速检验 方法原理:将选择性培养基中加入专一性的辛酯酶显色剂,并将其加载在纸片上,通过培养,如果样品中含有沙门氏菌,即可在纸片上呈紫红色的菌落。

三、沙门氏菌检验操作方法:1样品处理:无菌称取待测样品25g(或25mL)放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内,经充分振摇或置均质器中做成1:10的样品匀液。2接种:将测试片置于平坦实验台面,揭开上层膜,用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上,然后再将上层膜缓慢盖下,静置5 min使培养基凝固,最后用手轻轻地压 一下。每个样品接种两片。3培养:将测试片叠在一起放回原自封袋中,堆叠片数不超过12片,透明面朝上水平置于恒温培养箱内。培养温度为36℃±1℃,培养15~24h。4对测试片进行观察,呈紫红色的菌落为沙门氏菌;呈蓝色的菌落为其他大肠菌,葡萄球菌不生长。

四、检验方法注意事项:1有关验证试验表明,测试片具有较强的敏感性,在1.5×10-8稀释时仍可检出菌落。临床实际应用结果显示阳性检出率高于分离培养法1.84‰,复查准确率提高约13.0%。2 本法还可应用于从业人员体检、中毒样品和物体表面的检测,用取样棉签涂抹被测物体表面,放入装有3mL灭菌生理盐水的试管中,摇晃10s,然后取1mL接种到测试片上。3注意使用过的测试片上带有活菌,需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理 。

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