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食品蛋白质双缩脲法-皮尼克法检测

食品中蛋白质双缩脲法-皮尼克法检测方法介绍

四、双缩脲法-皮尼克法
1 原理:
双缩脲在碱性条件中,能与CuSO4结合成红紫色的络合物。pro分子中含有肽链与双缩脲结构相似,也呈此反应。本法直接用于测定像小麦粉等固体试样的pro含量。但作为铜的稳定剂,酒石酸钾钠比甘油好些。小麦粉中的pro能直接地一边抽出一边进行定量。
2 试剂
⑴甘油作为稳定剂:取10ml10N KOH溶液,3.0ml甘油加到937ml水中,激烈搅拌,同时加入4%CuSO450ml。
⑵酒石酸钠作稳定剂,吸10ml10N KOH溶液和20ml25%酒石酸钾钠溶液加到930ml水中,激烈搅拌,同时加入4%CuSO4液40ml。
配制以上两种溶液、试剂,必须澄清,无氢氧化铜生成,否则重配。
3       方法:样品测定
标准曲线绘制
准确称0.6g样品→使用试剂(1)
准确称0.5g样品→使用试剂(2)
假如用试剂(2)
(1)准确称样→0.5g→于80ml离心管→加1mlClC4→混合→加50ml酒石酸钾钠稳定剂→盖上盖子离心10min(4000转/分)→放置1小时→吸混合液15ml→于20ml离心管中→离心到完全透明→取上清夜5ml于→10ml容量瓶→加水定容→于550nm处测定吸光度,从标准曲线上查出pro含量。
(2)标准曲线绘制
按样品测定方法,根据样品中pro含量,取离心澄清样液0.0  2.0  4.0  8.0  10.0ml于10ml容量瓶中→分别加水定容,按照样品测定其吸光度。
事先用K氏定氮法测定样品中pro含量为横坐标,以上述吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
4       计算:蛋白质%=C/W×100
C—-从标准曲线上查得得pro含量(mg)
W—-测定样液时相当于样品重量(mg)

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