牛乳检验方法（引用GB/T5409—1985）
本标准适用于生鲜牛乳的检验。
1 取样规则
1.1 每次取样量最少为250mL。取样时要将牛乳混合均匀。取混合样品时，可采取在同一个样品瓶中混匀即可。在贮乳缸取样应开动搅拌器。一般取样量为0.2-1‰。
牛乳样品应贮于2-6℃，以防变质。
1.2 检验样品的准备
样品应置于15-20℃水中，保温10-15min，然后充分摇匀。冰冻乳应预先加温熔化，升温到20℃时充分摇匀后再取样。
2 牛乳检验方法
2.1 牛乳新鲜度试验
2.1.1滴定酸度：吸取10mL牛乳，置于250mL三角瓶中，加入20mL煮沸冷却的蒸馏水，再加入0.5mL0.5%的酚酞乙醇溶液，小心摇匀，用0.1N氢氧化钠标准溶液滴至微红色（见注），在1min内不消失为止。消耗0.1N氢氧化钠标准溶液的毫升数乘以10即得酸度（°T）。
注：滴定酸度终点判定标准颜色的制备方法如下。
取滴定酸度测定的同批和同样数量的样品如牛乳10mL，置于250mL三角瓶中，加入20mL煮沸冷却的蒸馏水，再加入3滴0.005%碱性品红溶液，摇匀后作为该样品滴定酸度终点判定的标准颜色。
2.2 全乳固体测定(减量法)
2.2.1仪器和试剂（同第一部分冷冻饮品总固形物的测定）
2.2.2方法
在带盖铝皿中，加入海砂10-20g，于98-100℃烘箱内烘至恒重。吸取5mL牛奶于此铝皿中，置分析天平上称量（准确至0.2mg），再置水浴上蒸干，擦去皿壁上的水迹，放入98-100℃的干燥箱中干燥2h后，加盖取出，但不要盖紧，置于干燥器中冷却后称重；再放入烘箱中干燥2h取出，冷却20-30min，将盖盖紧，称重。如此重复至前后两次重量差不超过2mg为止。
2.2.3计算： 全乳固体（%）=（W2-W3）×100/(W1-W3）
式中：W1——含有海砂的皿加样品重，g；
W2——含有海砂的皿加样品干燥后重，g；
W3——含有海砂的皿重，g。
2.2.4方法偏离
(1) 实际操作中不加海砂，但实验室必须有使用海砂进行测定和不使用海砂进行测定方法的验证数据，且验证结果应符合要求；
(2) 测定时牛乳实际称样量为大约取5mL样品并准确的称量其质量；
(3) 称取样品后，于可调温的电炉上小火烤至水分蒸干，再放于102±2℃鼓风干燥箱内直接烘3小时，加盖取出，置于干燥器内冷却0.5h，称量，重复加热0.5h，直到连续两次称量差不超过0.002g。
二、原料奶新鲜度的检验方法 酒精实验(YLNB 1.1)
1 原理
生鲜牛乳在酸度升高后，与等体积中性酒精混合后会出现絮片；酸度值可根据生成絮片时对应的乙醇浓度粗略地判定出来，参考标准见表。
|
酒精浓度 |
不出现絮片的参考酸度 |
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68º |
20ºT 以下 |
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70º |
19ºT 以下 |
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72º |
18ºT 以下（包括18ºT） |
注：1、生鲜牛乳新鲜度试验的基准方法为滴定酸度法（参见GB5409-1985，使用校准后的pH计指示滴定终点pH8.3）；
2 试剂
所有试剂均应为分析纯；实验用水至少应是蒸馏水。
2.1 酒精：根据需要用分析纯中性乙醇配制68º，70º，72º 的酒精（必要时配制75o的酒精）。
注：如酒精呈酸性，可用0.1mol/L或1mol/LNaOH进行中和，中和时推荐使用5g/L酚酞指示剂。
3 仪器
3.1 平皿，直径80-90mm
3.2 温度计：检定合格的温度计
3.3 酒精计：检定合格的酒精计
3.4 量筒，25mL
3.5 吸管，2mL
4 实验步骤
4.1准确取2mL牛奶于平皿中。
注：1、该步骤开始后，应将试验连续进行下去直至完成，中间不得间断；
2、酒精加入混合均匀后，应在30秒内观察结果；
4.2根据需要在加有奶样的平皿中加入2mL酒精，要边加边摇，使酒精与牛奶均匀混合，观察是否有絮片生成（絮片无论大小）。
注：试验应在20ºC的温度下进行，必要时扩大取样量和检样量。
5 结果判定
出现絮片的牛乳为酒精试验阳性乳，其酸度可根据表1粗略地判定出来。
三、原料奶中掺杂异物的检验方法 乳房炎乳的检出
1. 试剂配制
称取60g碳酸钠（Na2CO3.10HO2）溶于100毫升蒸馏水中，称取40g无水氯化钙溶于300毫升蒸馏水中。二者须均匀搅拌、加温、过滤，然后将二种滤液倾注一起，予以混合、搅拌、加温和过滤，于第二次滤液中加入等量的15%氢氧化钠溶液，继续搅拌、加温,过滤即为试液。加入溴甲酚紫于试液内，有助于结果的观察。试剂宜放在棕色玻璃瓶中保存。
2. 仪器
吸管：0.5mL，5mL
白色平皿
3 实验方法
吸取乳样3毫升于白色平皿中，加0.5毫升试液，立即回转混合，约10S后观察结果。
4 结果判定
|
现象 |
结果 |
|
无沉淀及絮片 |
—（阴性） |
|
稍有沉淀发生 |
±（可疑） |
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肯定有沉淀（片条） |
+（阳性） |
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发生粘稠性团块并继之分为薄片 |
++（强阳性） |
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有持续性的粘稠性团块（凝胶） |
+++（强阳性） |
另外:牛乳中体细胞数含量为乳房健康程度的指针,且与产乳量有密切不可分的关系,也可了通过运用快速的体细胞检验仪来观察牛的乳房健康状况.
四、原料奶中掺杂异物的检验方法 碱性物质的检出——玫瑰红酸法(YLNB1.4)
方法一：玫瑰红酸法
1.原理
鲜奶中如掺碱，可使指示剂变色，根据颜色的不同，粗略判断加碱量的多少。
2.试剂配制：
玫瑰红酸（0.05%乙醇溶液）：称取0.05g玫瑰红酸溶于100mL 95%的乙醇中。
3.检验方法
于盛有2mL牛乳的试管中加入2mL玫瑰红酸溶液，摇匀，观察颜色变化。
注明：牛奶酸度及新鲜度影响最终颜色的判定，酸度越高、新鲜度越差最终颜色越黄。
方法二：溴麝香草酚兰法
1.1原理
鲜乳中如掺碱物质，可使指示剂变色，由颜色的不同，大略判断加碱量的多少。
12仪器
试管，F 18×180mm,试管架,吸管2mL。
1.3试剂配制
取0.04克溴百里香草酚兰（溴麝香草酚兰）溶于100mL95%分析纯乙醇中。
1.4方法
取乳样约2m L于小试管中，沿管壁慢慢加入指示剂约0.5mL，将试管轻轻斜转2-3圈，然后垂直放置2分钟后，观察指示剂与样品接触面颜色特征以判定检验结果。同时用不含碱的正常生鲜牛乳作空白对照。
1.5结果判定
正常奶：黄色
掺碱奶：0.03%黄绿色 0.05%淡绿色
0.1%绿色 0.3%深绿色
0.5%青绿色 0.7%淡青色
1.0%青色 1.5%深青色
1.6注意事项
掺水乳（因水的PH大都在7—9之间）、掺洗衣粉乳（因洗衣粉中加有碳酸钠）、乳房炎乳（因为细菌分解乳酪蛋白产生氨及乳房代谢功能的改变而造成PH值升高）与掺碱指示剂的接触面均可呈黄绿至淡绿色。
五、原料奶中掺杂异物的检验方法 食盐的检出(YLNB1.5)
1 原理
鲜奶中氯化物与硝酸银反应，生成氯化银沉淀，用铬酸钾指示剂，当牛奶中的氯化物与硝酸银作用后，过量的硝酸银与铬酸钾生成砖红色的Ag2CrO4 沉淀。
2 试剂配制
2.1 9.6g/L硝酸银溶液：取分析纯硝酸银置于105℃烘箱内烘30min，取出放在干燥器内冷却后，称取9.6g溶于1000mL蒸馏水中。
2.2100g/L铬酸钾溶液：称取分析纯铬酸钾10g溶于100mL蒸馏水中。
注：硝酸银溶液应储存于棕色试剂瓶备用。
3 仪器
3.1 吸管：2mL
3.2 试管：F18×180mm
4 实验方法
取2mL牛乳于试管中，加入100g/L铬酸钾溶液5滴，摇匀，再加入9.6g/L硝酸银溶液1.5mL，摇匀后，立即观察结果。
注：在加入硝酸银后，应立即观察颜色，做出判定；否则，判定结果会偏高。
6 注意事项
6.1试剂加入顺序不同影响测定结果，先加入硝酸银其结果偏高10—20mg%，因此应按“牛奶+指示剂+硝酸银”或“指示剂+牛奶+硝酸银”的顺序进行。
6.2 日常试验应尽量在20ºC左右的室温下进行，仲裁试验必须在20ºC条件下进行。
六、原料奶中掺杂异物的检验方法 亚硝酸盐和硝酸盐检出(YLNB1.6)
方法一：
- 1. 原理
鲜奶中的亚硝酸盐与显色试剂作用，形成红色的化合物；鲜奶中的硝酸盐被还原成亚硝酸盐后，再与显色试剂形成红色化合物。
- 试剂
哈尔滨龙泽科技有限公司的鲜奶亚硝酸盐和硝酸盐试剂。
- 操作方法
取鲜奶亚硝酸盐或硝酸盐试剂（按试剂说明添加）到试管中，加入被检奶样，振荡，必要时加热溶解，1-2分钟观察结果。
4. 结果判定：
正常乳：呈无色
掺亚硝酸盐或硝酸盐乳：呈粉红色，且由掺入量的增加，颜色逐渐加深。
5. 注意事项
5.1.1药品瓶必须用颜色较深的纸包好避光保存。
5.1.2药品置于干燥的环境中保存，最好放在干燥器中。
5.1.3已打开包装的药品要密封好后于干燥器中避光保存，如果发现有结块现象应立即停止使用。
方法二：
1.试剂配制
1.1显色剂：称取对－氨基苯磺酸0.6g,甲－萘胺0.2g，甲－萘酚0.1g,溶于400ml 50%的醋酸溶液中，置棕色试剂瓶中保存。
1.2还原剂：硫酸钡44.0g, 硫酸锰5.0g, 锌粉1.0g, 混合在一起，干燥研磨成细粉末，密闭保存。
2.检验方法：吸取2.0ml牛乳于试管中，加入还原剂约0.1g混匀（亚硝酸盐检测不加还原剂），加显色剂0.5－1.0 (ml)摇匀，观察颜色。
- 结果判定：
掺假乳：微粉－水粉－粉红－红色
（根据颜色的深浅判断硝酸盐和亚硝酸盐含量的大小）
正常乳：无色
七、原料奶中掺杂异物的检验方法 淀粉的检出(YLNB 1.8)
1.原理：淀粉遇碘呈兰色反应。
2.试剂：
KI—I试剂：碘化钾20g加碘5g先用大约20mL的蒸馏水溶解，然后定容至250mL。
3.方法：
取乳2mL，加热煮沸，观察乳液是否有沉积现象，然后加入3-5滴KI—I试剂。
4.判定结果：
正常奶：呈黄色；
掺淀粉奶：呈兰色，且颜色深浅与掺入量成正比。
4.判定结果：
正常色：
掺淀粉奶：呈兰色，且颜色深浅与掺入量成正比。
八、原料奶中掺杂异物的检验方法 硫酸盐的检出(YLNB 1.9)
1.原理
鲜奶中的硫酸盐与氯化钡形成硫酸钡沉淀，过量的钡离子与玫红酸钠反应生成玫红酸钡呈玫瑰红色。若鲜奶中掺入硫酸盐后，因氯化钡被硫酸盐全部沉淀，无游离的钡离子，因而不能与玫红酸反应，故呈黄色。
2.试剂配制：
2.1 称取氯化钡3克，加蒸馏水少许溶解后，加浓盐酸20mL，加蒸馏水至250mL。
2.2 玫红酸钠1克，氯化钠49克，干燥研磨至粉末状，密闭保存。
3.方法：
取乳2mL于小试管中，加入玫红酸钠指示剂约0.3克混匀，加氯化钡溶液4—5滴混匀，放置3—5分钟后观察结果。
4．结果判定：
正常乳：呈玫瑰红色
最低检出量：0.1%。
掺入硫酸盐乳呈黄色或土黄色。
5．注意事项：
5.1 严格控制酸度，酸度过大易褪色，酸度不足不显色。
5.2 对不能判定奶样可取奶10mL，加10%氯化钡溶液0.5—1mL离心沉淀，正常鲜奶沉淀物很少，掺硫酸盐奶有较多量硫酸钡沉淀。
九、原料奶中掺杂异物的检验方法 蔗糖的检出 (YLNB 1.10)
1.原理
蔗糖在酸性溶液中水解产生的果糖与溶于强酸内的间苯二酚溶液加热后显红色沉淀反应。
2.试剂配制
称取间苯二酚0.4克用少量蒸馏水溶解，加浓盐酸200mL，再加蒸馏水稀释至600mL置棕色瓶，现用现配。
3.方法
取间苯二酚盐酸溶液1.5mL于小试管中，加鲜乳5滴，加热煮沸2.5分钟，观察结果。
5.注意事项：
5.1 盐酸浓度不能高也不能低否则影响显色反应。
5.2 试剂须置棕色瓶中，配制及贮存过程中被有机物污染，颜色变黄或变红则不能使用。
5.3 加热时间过长，其它醛类糖也能产生浅红色的反应。
十、原料奶中掺杂异物的检验方法 尿素的检出 (YLNB 1.11)
1.原理
尿素与二乙酰——肟在酸性条件下，经镉离子（或三价铁离子）的催化产生缩合，并在氨基硫脲存在下，生成3，5，6—三甲基—1，2，4三胺的红色复合物。
2.试剂配制
2.1 酸性试剂：在1升容量瓶中加入蒸馏水约100mL，然后加入浓硫酸44mL及85%磷酸66mL，冷却至室温后，加入硫氨脲30mg，硫酸镉2克溶解后用蒸馏水稀释至1000mL。贮棕色瓶中冰箱内保存半年不变。
2.2 2%二乙酰——肟试剂：称取二乙酰一一肟2克，溶于100ml蒸馏水中。贮棕色瓶中放置冰箱内，可保存半年不变。
2.3 应用液：取酸性试剂90mL加2%二乙酰一一肟10mL混合均匀，即可使用。
3. 方法
取应用液1—2mL于试管中，加鲜奶一滴加热煮沸约1分钟观察结果。
4．结果判定：
正常：无色或微红色
掺入尿素或尿的奶立即呈深红色。掺入量越大，显色越快，红色越深；
注：正常奶煮沸时间超过2分钟，也可出现淡红色。
十一、原料奶中掺杂异物的检验方法 饴糖（糖稀）及葡萄糖(YLNB1.12)
1.原理
饴糖中的葡萄糖被葡萄糖氧化酶氧化生成葡萄糖酸及过氧化氢；后者在过氧化物酶的作用下，使还原性氧受体邻联甲苯铵氧化成兰色化合物。
2.方法
用医院用来检验尿糖用的尿糖试纸测试。
3.结果判定
按照尿糖试纸上的要求进行判定。
十二、原料奶中掺杂异物的检验方法 甲醛的检出(YLNB1.13)
1 原理
甲醛常被作为防腐剂而掺入牛乳中，鲜奶中的甲醛在酸性溶液中与三氯化铁产生紫色反应。
2 试剂配制 称取0.2g三氯化铁溶于100mL浓盐酸中。
3 仪器
3.1 吸管：2mL，0.5mL
3.2 试管：F18×180mm
3.3 试管架
3.4可调式电炉
4 实验方法
取乳样2mL于小试管中，加入三氯化铁盐酸溶液0.5mL，混匀于沸水中水浴1分钟，观察颜色。
5 结果判定
正常：呈黄色或淡黄褐色。
掺甲醛乳：呈紫色。
最低检出量1/4000。有些涂料中含有甲醛或甲醛的衍生物，亦可检出。
十三、原料奶中掺杂异物的检验方法 硫代硫酸钠的检验(YLNB 1.14)
1.实验原理: I2 + 2S2O32- = 2I- + S4O62-
碘与淀粉在有I-存在时能形成一种蓝色可溶性的吸附化合物，当加入硫代硫酸钠后，硫代硫酸钠与碘反应，从而使蓝色消失。
2.实验试剂：
1） 碘一碘化钾溶液：7g碘与18g碘化钾溶于100mL水中，稀释至1000mL。贮存于棕色试剂瓶中，避光保存。
2） 10g/L淀粉指示剂，现用现配。
3.方法：
取2mL牛奶，加入2滴淀粉指示剂，摇匀后，加入0.05mL碘一碘化钾溶液，立即摇匀后观察颜色。
结果判定：
正常乳：蓝色（下图的颜色均为正常色）
掺假乳：乳白色或灰白色（如下图）
附加说明：
正常色（蓝色）不可能把所有的蓝颜色都逐一的列出来，只要是蓝色系列均为正常色。
十四、原料奶中掺杂异物的检验方法 过氧化氢的检验(YLNB1.15)
方法一：半定量试纸条法：
1.原理
过氧化氢酶将过氧化氢的氧转移至有机的氧化还原指示剂，形成一种蓝色的氧化产物。
2.药品 半定量试纸条
3.操作方法
取下一试纸条后，立即密封保存管。
将试纸条浸入待测溶液一秒种，将反应区充分浸润。
轻轻移开试纸条，抖落过量的水分，15秒后将反应区的颜色与标准比色条对比。
四、结果判定
通过与标准色对比，确定牛乳中的过氧化氢含量，如发现检测中的试纸的蓝色过深，是由于过氧化氢的含量过高而导致。
五、注意事项
未开启包装的试纸条应在冰箱中保存，开封后应尽可能干燥低温保存。尽量保存在10—25下。
方法二：碘化钾－淀粉方法
10.1原理
过氧化氢在酸性条件下，能使碘化物氧化析出碘，KI—I与淀粉反应呈蓝色。
10.2试剂
a淀粉溶液：溶解3g可溶性淀粉于10mL水中，然后将其慢慢倒入100mL沸水中，边加边搅拌，溶解完全后，使溶液冷却。现用现配。
b碘化钾淀粉溶液：将3g碘化钾溶解于5mL水中，将其倒入淀粉溶液中，搅拌均匀。现用现配。
c硫酸溶液， 浓硫酸:水=1:1
10.3操作步骤
吸取1mL鲜奶于试管中，加入0.2mL碘化钾淀粉溶液，混匀。加入硫酸溶液1滴，摇匀，1分钟内观察颜色变化。
10.4结果判定
正常乳：呈乳白色，参考下图
掺防腐剂乳：呈蓝色，且随着掺入量的增加颜色逐渐加深。参考下图
|
H2O2含量‰ |
色卡编号 |
H2O2含量‰ |
色卡编号 |
|
1.0 |
350U |
0.09 |
2758U |
|
0.9 |
349U |
0.08 |
259U |
|
0.8 |
357U |
0.07 |
2685U |
|
0.7 |
341U |
0.06 |
289U |
|
0.6 |
3288U |
0.05 |
272U |
|
0.5 |
3302U |
0.04 |
271U |
|
0.4 |
3035U |
0.03 |
263U |
|
0.3 |
303U ∷ |
0.02 |
无 |
|
0.2 |
282U ∷ |
0.01 |
无 |
|
0.1 |
2768U |
0.00 |
无 |
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