01. 菌落总数GB4789.2-2010   

A.在菌落计数时，PCA上的霉菌和酵母菌应不应该计数？
（个人认为解析有误，根据该标准对菌落总数的定义：每g/ml检样中形成微生物菌落总数。该定义指明是微生物，而不是细菌总数。因此所有PCA上的菌落都该计算在内，包括细菌总数及霉菌酵母。在此感谢所有提出该问题的童鞋们，每人粮票+8，金币+2）
B. 标准中7.2.3提到若所有平皿上为菌落蔓延而无法计数时，则报告菌落蔓延。真的报菌落蔓延么？
（该标准提到了如果样品中可能含有蔓延菌落时需覆盖一薄层培养基，实验证明该操作的确有效。本人参加了辽宁省出入境检验检疫局的测量审核的样品中的确也存在蔓延菌落，就是正常操作，培养2天后菌落蔓延而无法计数，那我就报菌落蔓延么？那结果肯定是：不满意！！事实上本人在正常操作的同时，使用了添加TTC的PCA，同时用3M测试片。3种方法，双人测试。正常一层培养基未添加PCA的菌落蔓延，其他两种方法均可计数，而且结果偏差很小。最终结果是本次测量审核结果：满意！所以建议大家在做未知样品的时候可以用添加了TTC 的PCA（TTC浓度为0.5%，添加量为0.5ml/100mlPCA)

02. 大肠菌群GB4789.3-2010 
大肠菌群大家都没有提出问题，那我就抛砖引玉下，提出以下问题：（凡回帖探讨者均奖励粮票，金币，回答最全面者奖励粮票+10，金币+5）
A. LST灭菌后导管有气泡，大家是怎么解决的？（论坛有该疑问的汇总帖，但不全面，排气式灭菌锅按该贴操作还会有气泡，如能答上也有重奖哦）
一 先检查下灭菌锅压力是否达到设定值
二 灭菌完后不要急着打开灭菌锅 等灭菌锅温度降到与室温差不多时再打开
三 试管塞不要塞得太紧
四 灭菌后将LST试管放入冷水中 根据热胀冷缩原理 
五 灭菌温度达到100多度时可让其多排会气～ 

B. VRBA（紫红胆盐）大家是怎么加热灭菌的，哪种方式最好？
可以用电炉加热，一般我们用微波炉加热，可以3瓶一起加热，另外用多了就知道定时多久，也不用人一直看着

C. VRBA上的大肠菌群须用BGLB验证阳性比例（挑10个接种BGLB肉汤，按阳性比例计算最终结果），如果我做了3个梯度（每梯度做2个平行平皿），其中有2个梯度计数在15-150之间，请问大家该怎么挑取这10个典型或可疑菌落？）
其实此步骤目的是验证你人为判断在VRBA上的可疑菌落中大肠菌群的比例。因为平板计数时只是人为的去判断菌落大小及形态，也就是你判断的均为可疑菌落，但最终的数量就得通过BGLB来验证。所以无论你挑哪个梯度均可，只要挑取总数10个，接入BGLB，通过BGLB产气数量比例来确定最终大肠菌群数量。

D. 样品匀液PH应在6.5至7.5之间，大家是怎么调节的？
调节pH主要用无菌的磷酸缓冲液微调，如果样品pH值较低或较高，按标准用无菌的NaOH和盐酸调节 

E. 做了1批果汁的大肠菌群，采用第一法，吸取10ml原液加入双料LST，1ml加入单料LST，10-11ml，10-21ml，做出结果为3,2,0,0，请问结果报（）MPN/ml？
因为1:10和1：100的试管均为阴性，所以1:100的试管数据不参与判定。即查表3,2,0.由于所加液体为10,1,0.1，查表数据应降低100倍，最终报0.93MPN/mL 

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