1. 检验标准: GB/T 8538-2008 附录B.4饮用天然矿泉水检验方法
2.验证项目:菌落总数
3.合格标准:试验组的菌回收率不得低于70%。(试验组菌数-供试品对照组菌数)÷菌液
组≥ 70%
4.实验材料:
4.1 高压蒸汽灭菌器
4.2 干热灭菌箱
4.3 培养箱36℃±1℃
4.4 电炉
4.5 冰箱
4.6 天平
4.7 pH计或精密pH试纸
4.8 灭菌试管、平皿(直径9cm)、刻度吸管、采样瓶等。
5. 菌液制备:
5.1 取大肠埃希氏菌(ATCC 25922)、金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)菌种第 3代~5 代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物(18h~24h),分别用 5.0mL 吸管吸取 3.0 mL~5.0mL 稀释液加入斜面试管内,反复吹吸,洗下菌苔,制成混合菌液。随后,用 5.0mL 吸管将洗液移至另一无菌试管中,用电动混合器混合(振荡)20s,或在手掌上振敲 80 次,以使细菌悬浮均匀。
5.2 初步制成的菌悬液,先用血球计数板测显微计数其含菌浓度,然后以稀释液稀释至所需使用的浓度。
6. 培养基和试剂的制备:
6.1 营养琼脂培养基:称取营养琼脂干粉培养基33g,溶于1000mL蒸馏水中,加热溶解,分装,121℃高压灭菌15min。
6.2 无菌生理盐水:称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15min。
7. 饮用天然矿泉水菌落总数的测定方法验证
验证试验进行 3次独立的平行试验,并分别计算各试验菌每次的回收率。
7.1 试验组:取水样1mL和30~300cfu试验菌,分别注入平皿中,立即倾注
15~20mL冷却到46℃左右的营养琼脂培养基,旋转平板,将培养基与样液充分混合,待培养基凝固后,翻转平皿,置36℃±1℃的培养箱中培养48h,并做平行样。
7.2 菌液组:取1ml菌液浓度为30~300cfu/mL试验菌测定所加的试验菌数,做平行样。
7.3 供试品对照组:取水样1mL,按菌落总数平板计数方法测定供试品本底菌数。
7.4 结果见表
试验组细菌平板计数(回收率%)
验证菌株 |
平皿号 |
供试品对照组cfu/mL |
菌液组cfu/mL |
试验组cfu/mL |
回收率% |
|
独立试验一 |
大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌(36℃±1℃培养48h计数) |
1 |
32 |
254 |
266 |
92.0 |
2 |
33 |
256 |
268 |
|||
独立试验二 |
大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌(36℃±1℃培养48h计数) |
1 |
35 |
276 |
288 |
90.8 |
2 |
36 |
278 |
286 |
|||
独立试验三 |
大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌(36℃±1℃培养48h计数) |
1 |
30 |
269 |
271 |
91.8 |
2 |
28 |
264 |
276 |
7.5 结论:在3次独立的平行试验中,采用培养基稀释法,回收率均大于 70% ,本次验证共进行三次,在相同的检验条件下,检验结果均符合规定。
8.是否对方法偏离?
否
9.结论:
对饮用天然矿泉水中菌落总数的检测符合标准《GB/T 8538-2008 附录B.4饮用天然矿泉水检验方法》的要求
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